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ELISA檢測樣本的處理

發(fā)布時間: 2023-10-12  點擊次數(shù): 1274次

 

在收集標本前需有一個完整的計劃,需要清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。ELISA檢測提倡新鮮標本盡早檢測,對收集后當天就進行檢測的標本,及時儲存在4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集標本,請取材后,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實驗質(zhì)量,所以避免反復凍融。


◇ 液體類標本:

包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。


◇ 血清:

室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。


◇ 血漿:

應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。


◇ 尿液:

用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。


◇ 細胞培養(yǎng)上清:

檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。


◇ 組織標本:

切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。 

 

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